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間充質(zhì)干細胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞，存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。在不同的誘導(dǎo)條件下，可以向除造血干細胞以外的，骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化。間充質(zhì)干細胞的易獲得、易擴增、多潛能等特性使其在再生醫(yī)學中的應(yīng)用前景十分光明。
對于體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞的鑒定，通?？梢愿鶕?jù)以下三條標準進行驗證。
01
細胞形態(tài)學觀察
可運用組織塊貼壁法、酶消化法以及兩種方法的結(jié)合分離出MSC，通過傳代培養(yǎng)后，進行形態(tài)學觀察。幾乎所有的MSC都是貼壁生長，具有較強的貼壁能力。MSC多數(shù)呈纖維細胞樣生長，少量呈梭形或不規(guī)則三角形。
02
表面標志物鑒定
可采用流式細胞儀對MSC的細胞表型進行鑒定，MSC屬混雜細胞群，其表面抗原也具有非專一性, 它可同時表達間質(zhì)細胞、內(nèi)皮細胞和表皮細胞的表面標志，如粘附因子、生長因子和細胞因子受體以及整合素家族等。
MSC的細胞表面標志物鑒定標準為：CD105、CD73和CD90的陽性率≥90%；而CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR呈陰性，陽性率≤5%。（如下圖）
流式細胞儀檢測 hUC-MSC 的表面標志物
需要注意的是，陽性標記不具特異性，并非每個細胞都同時表達CD105、CD73和CD90。
03
多向分化潛能鑒定
MSC具有分化為脂肪細胞、成骨細胞和軟骨細胞的能力，可通過特異性染色鑒定體外成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)后的分化能力。
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成脂誘導(dǎo)分化鑒定
細胞成脂分化誘導(dǎo)2周左右，于倒置顯微鏡下觀察，可見細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)油滴，經(jīng)油紅O染色后為紅色。
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成骨誘導(dǎo)分化鑒定
細胞成骨分化誘導(dǎo)3周左右時，于倒置顯微鏡下觀察，可見不透明區(qū)域，經(jīng)茜素紅染色后可見密集的紅色沉淀物呈結(jié)節(jié)狀。
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成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定
細胞成軟骨分化誘導(dǎo)2周左右，于倒置顯微鏡下觀察，可見細胞經(jīng)阿利新藍染色為淡藍色。
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參考文獻
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